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PCR實驗室規(guī)劃
來源:未知    日期:2021-05-10    閱讀()
PCR實驗室規(guī)劃
擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域,試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染,進入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進行。
試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴增區(qū)→產(chǎn)物分析區(qū)。
各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進行。

試劑準(zhǔn)備區(qū):
該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。 對與氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。







樣品制備區(qū):
該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。
 
擴增區(qū): 
該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增。此外,已制備的DNA模板(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。
 
產(chǎn)物分析區(qū): 
該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。
本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源,因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。







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